Kierunki i możliwości modyfikacji metod kriokonserwacji oraz oceny jakości nasienia knura
Spis treści
- Wykaz skrótów5
- Wprowadzenie9
- Kriogenika9
- Wykorzystanie kriogeniki w zachowaniu bioróżnorodności zwierząt10
- Kriokonserwacja materiału biologicznego13
- Kriokonserwacja oocytów i zarodków świni14
- Kriokonserwacja nasienia knura17
- Technologia kriokonserwacji nasienia knura18
- Podstawowy skład rozcieńczalnika mrożeniowego nasienia knura20
- Ocena podstawowych parametrów jakości nasienia21
- Proces apoptozy24
- Zmiany apoptotyczne w gonadach i gametach męskich oraz wybrane metody oceny28
- System antyoksydacyjny w nasieniu32
- Związki antyoksydacyjne i osłaniające oraz nowe rozwiązania technologiczne w kriokonserwacji nasienia knura33
- Cel badań36
- Materiał i metody37
- Doświadczenie 1: Opracowanie składu rozcieńczalnika mrożeniowego w oparciu o dodatek wybranych antyoksydantów i związków osłaniających37
- Przygotowanie rozcieńczalników38
- Ocena jakości nasienia45
- Komputerowo wspomagana analiza nasienia (CASA) z wykorzystaniem analizatora45
- Ocena morfologii plemników46
- Ocena integralności akrosomu46
- Ocena zmian w przepuszczalności błony komórkowej plemnikówprzy zastosowaniu fluorochromu YO-PRO-1 i jodku propydyny47
- Identyfikacja reszt fosfatydyloseryny na powierzchni błony komórkowej plemników przy zastosowaniu aneksyny V-FITC i jodku propydyny47
- Ocena fragmentacji DNA plemników przy pomocy metody TUNEL47
- Ocena mitochondrialnego potencjału transbłonowego plemników48
- Doświadczenie 2: Ocena in vivo zdolności zapładniającej kriokonserwowanego nasienia knura48
- Synchronizacja cyklu płciowego loszek49
- Przygotowanie loszek do zabiegu domacicznej inseminacji49
- Analiza statystyczna53
- Wyniki53
- Doświadczenie 1: Opracowanie składu rozcieńczalnika mrożeniowego w oparciu o dodatek wybranych antyoksydantów i związków osłaniających53
- Ocena jakości nasienia świeżego53
- Ocena jakości nasienia kriokonserwowanego z dodatkiem wybranych antyoksydantów oraz substancji osłaniających błony komórkowe plemników55
- Doświadczenie 2: Ocena in vivo zdolności zapładniającej kriokonserwowanego nasienia knura60
- Selekcja rozcieńczalników mrożeniowych60
- Ocena kriokonserwowanego nasienia użytego do inseminacji loszek61
- Skuteczność unasieniania loszek nasieniem kriokonserwowa-nym w zmodyfikowanych rozcieńczalnikach61
- Omówienie wyników64
- Wnioski67